Türk televizyon ve sinemasının başarılı isimlerinden biri olan Defne Kayalar, 31 Mayıs 1975 tarihinde Ankara'da dünyaya geldi. Bilkent Üniversitesi Güzel Sanatlar, Tasarım ve Mimarlık Fakültesi Grafik Tasarımı Bölümü mezunu olan Kayalar, daha sonra İstanbul Bilgi Üniversitesi İletişim Fakültesi Radyo Televizyon ve Sinema Bölümü'nde asistanlık görevini üstlendi.
Oyunculuğa adım attığı dönemde, 2003 yılında Uğur Yücel ile birlikte Alacakaranlık dizisinde rol alarak dikkatleri üzerine çeken Kayalar, 2004 yılında ise Yazı Tura filminin yapımcılığını üstlendi. Kariyerine hızlı bir başlangıç yapan başarılı oyuncu, 2010 yılında Keskin Bıçak adlı dizide ve 2013 yılında 20 Dakika dizisinde başarılı performansıyla izleyiciyi etkiledi.
2014 yılında Medcezir dizisine konuk oyuncu olarak katılan Defne Kayalar, "Sedef Kaya" karakteriyle ekrana dönüş yaptı. Başlangıçta konuk oyuncu olarak yer aldığı dizi, kısa sürede ana karakterlerden biri haline geldi. Bu dönemde dizinin yönetmeni Ali Bilgin ile evlenen oyuncu, hem profesyonel hem de kişisel hayatında dikkat çekici bir dönem yaşadı.